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揭秘广东省第二人民医院P3实验室 新冠病毒是这样被“揪出来”的
“这里是与病毒‘零距离’接触的地方，整个实验室完全密封，室内处于负压状态，我们喜欢用‘三流’来形容它，即人流、物流、气流的单向流动，确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。” 广东省第二人民医院P3实验室主任林剑国说，而“这里”指的就是P3实验室。 广东省第二人民医院每天400多份新冠肺炎核酸检测就是在这里开展的。一起来揭开省二医P3实验室的神秘面纱，看看新型冠状病毒究竟是怎样被“揪出来”的。 文、图／广州日报全媒体记者何雪华 通讯员陈淑华 核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”，而检测流程中的每一个环节都是精细活，容不得半点马虎。 在操作中，实验员面对眼前的样本，需要“一个一个地揭开盖子，开盖加样和核酸提取”，这无疑是与“病毒”正面交锋，林剑国指出，实验室内的检测流程可分为5个步骤：样本进入“传递窗”-灭活处理-开盖加样和核酸提取-扩增反应判断结果-高压灭菌。 1.样本进入实验室。采集的检测样本如咽拭子或肛拭子，在进入P3实验室前就得先进入一个特殊的窗口——“传递窗”，这个窗口也叫做Air Lock（空气锁）。这个传递窗有不能同时打开的双重门，保证传递样本时带进去的空气被隔离在双重门中，保证实验室外的环境不受污染。 2.检测前的灭活处理。样本在水浴箱经半个小时56℃高温灭活，这样会使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在对样本进行检测时相对安全，但是病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。 3.进行开盖加样和核酸提取。广东省第二人民医院检验医学部副主任技师胡亮杉是进入P3负压实验室完成设备调试、程序设定、试剂试用等前期准备工作的第一人。 据她介绍，在标本处理间，实验员拿到灭活后的样本时，第一个动作就是振荡，尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中，再静置五分钟进行沉淀。接下来就是开盖加样，必须人手操作，而且需要两个人高度配合才能完成，一人拧开样本罐盖子，另一人拿着微量移液器在样本罐中吸取微量溶液，放到另一个提取管里，一个样本对应一个提取管，再拧上管盖。 就这样，400多份样本要打开瓶盖吸取转移400多次，每一次都是实验员与病毒面对面的“开撕”。 “样本在开盖转移的过程中，病毒就非常容易暴露在实验室的空气中，近在咫尺，与我们几乎就是零距离接触了。”胡亮杉说，“开盖加样的时候，拿着微量移液器的手往往因为戴着双重手套，而显得有些笨拙，可又不得不小心翼翼，再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔，所有动作都显得缓慢，手也因为劳累而不时颤抖，经常是左手扶着右手完成加样的。” 人工核酸提取的步骤更是复杂，考验的是实验员的耐心与谨慎。 “核酸提取可以使用仪器辅助，但由于比对的需要，往往要加以人工操作，这需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤，其中需要打开管盖的操作就达7次以上，完成一例人工核酸提取要50分钟左右。”胡亮杉说。 4.扩增反应——45个循环绘制荧光曲线判断结果。提取的核酸送到核酸检测室内，就要上仪器了。提取的核酸加入到扩增试剂中，通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应，先将提取的核酸逆转录成DNA，再以DNA为模版，对特定位点进行扩增，利用不同的温度进行变性、退火和延伸，每个循环采集荧光值，45个循环后绘制荧光曲线，用时约110分钟，实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性和阳性。 5.污染物的高压灭菌处理。实验过程产生的污物通过高压灭菌后，按相关普通医疗垃圾处理。“物流”的终点在这里就结束了。 怎样避免出现“假阳性”“假阴性”？ 在P3实验室，任何一个环节都不能忽视，任何一个环节出现问题都可能导致“假阴性”或“假阳性”。 检测质量的保障措施在实验室前就开始了——样本采集人员须经严格培训考核才能上岗，每个动作流程须按规定进行，样本护送须由专人专道配送到实验室。对可疑样本，选用不同的试剂进行复核确定，以防止“假阴性”；每一批实验，均会随机插入三个以上空白对照，针对阳性样本会进行病毒基因的测序比对，以防止“假阳性”；检测后，定期随机抽取检测后的样本送第三方实验室进行检测，对数据进行对比分析。 在P3实验室工作是怎么样的？ 病毒核酸检测，安全是重中之重，尤其是工作人员的安全，中级防护服穿脱步骤一个都不能少。 首先在清洁区内穿戴中级防护服-通过缓冲间进入到实验室内负压工作间，在这里进行标本处理，核酸提取及检测-完毕后进行空间、表面消毒，按顺序脱下防护服-通过淋浴间更衣后，回到清洁区。 广东省第二人民医院P3实验室目前有21人，实行一天三班制。在疫情非常时期，为了满足检测需求，缩短检测时间，在原有团队基础上，从风湿免疫科、血液科等科室实验室调配增加人员。“侦察兵”的检测团队70%以上是硕士以上学历，均经过分子生物学的培训和拥有PCR上岗证。 按照“新型冠状病毒肺炎诊疗方案”及生物安全要求，检测人员需在P3实验室负压密闭的空间里穿着三级防护装备，在5个小时内不吃不喝，甚至要穿戴成人纸尿裤以解决上厕所的需要，还要随时克服因负压差及严密装备导致的头晕、呕吐等症状。 不仅如此，检测人员还要克服心理上的恐惧。咽拭子样本是从疑似患者鼻咽部采集，可能含有较多新冠病毒，检测人员从采样罐里拿出样本时，病毒在这样密闭的环境中很容易借助空气传播。 “他们与战斗在病房里的医护人员不同，他们在实验室里，每天与病毒近距离接触，是别人看不见的‘最前线’。”广东省第二人民医院P3实验室主任林剑国说。 (责任编辑：Doctor001) |
